完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；ELISA試劑盒酶的底物；陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考尺度品和控制血清（定量測定中）；酶聯(lián)物（結(jié)合物）及標(biāo)本的稀釋液；洗滌液；酶反應(yīng)終止液。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。
疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的前提下一般可保留6個月以上。可作ELISA中載體的材料良多，zui常用的是聚苯乙烯。ELISA試劑盒以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體，反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離，洗滌利便，ELISA試劑盒一般均配以特殊儀器。為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣，可應(yīng)用如下的試驗：用其他免疫學(xué)測定方法選出一個典型的陽性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操縱步驟進(jìn)行測定，然后比較結(jié)果。小試管還可以當(dāng)作比色杯，ELISA試劑盒zui后直接放入分光光度計中比色。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大進(jìn)步，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕捉包被法，試驗的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的機(jī)能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍留存原來的免疫學(xué)活性，加之它的價格低廉，所以被普遍采用。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力。控制反應(yīng)前提，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于10%。例如，在檢測抗DNA抗體時，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。ELISA板的特點是可以同時進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測，并可在特制的比色計上迅速讀出結(jié)果。換言之，包被等于抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大，這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體。
ELISA載體的外形主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附機(jī)能好，空缺值低，孔底透明度高，ELISA試劑盒各板之間、統(tǒng)一板各孔之間、統(tǒng)一板各孔之間機(jī)能相近。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點的暴露面處于*反應(yīng)狀態(tài)，因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為敏捷。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。
小試管作為固相載體也有較大的吸附表面，而且標(biāo)本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加。在ELISA中，用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。當(dāng)抗原決定簇存在于或臨近于疏水區(qū)域時，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕捉包被法，ELISA試劑盒即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。ELISA試劑盒聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附機(jī)能比聚苯乙烯高，但空缺值也略高。固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預(yù)包被，也可進(jìn)步核酸的結(jié)協(xié)力。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯的特點為質(zhì)軟板薄，可剪割，價廉，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號3463室
主營產(chǎn)品：酶聯(lián)免疫試劑盒，食品農(nóng)殘檢測，細(xì)胞系，培養(yǎng)基，胎牛血清
©2019 版權(quán)所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號：滬ICP備14033764號-3 總訪問量：1266426 站點地圖 技術(shù)支持：環(huán)保在線 管理登陸
