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今天我公司技能專員特意為大家準(zhǔn)備十幾條ELISA操作的要點(diǎn)細(xì)節(jié)，閱覽之后能夠總結(jié)一下您在實(shí)驗(yàn)中有哪些要點(diǎn)被忽略掉了。酷愛ELISA實(shí)驗(yàn)的新手們需留意這些細(xì)節(jié)：
1.不管是試劑盒，還是其它產(chǎn)品，在運(yùn)用之前咱們都要仔細(xì)閱覽說明書。
2.相同的，一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。
3.按說明書確定一切試劑齊全(數(shù)量、體積)。
4.標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，留意低溫保存。
5.ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*佳信號(hào)和背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在恰當(dāng)規(guī)模內(nèi)的規(guī)范品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)供給的規(guī)模進(jìn)行操作。
6.規(guī)范品的制造：關(guān)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱覽說明書，留意每批的細(xì)節(jié)。在運(yùn)用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其間的細(xì)胞因子。依據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
7.一般待測抗原規(guī)范曲線的線性規(guī)模的可通過將規(guī)范品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用規(guī)范的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改動(dòng)酶底物體系可在一定規(guī)模內(nèi)提高靈敏度。
8.依據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。
9.按說明書將所用試劑平衡至室溫，制造所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技能攻略。
10.挑選抗體時(shí)挑選一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對；若挑選兩個(gè)單抗，有必要識(shí)別不同表位的抗體；從同一家公司挑選抗體對。
11.為了優(yōu)化靈敏度，主張過夜孵育規(guī)范品和標(biāo)本。
12.若運(yùn)用過氧化物酶作為顯色體系，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
13.當(dāng)測定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，主張?jiān)跇?biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
14.準(zhǔn)備好一切實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等。